干燥贮存的基因工程藻杀灭淡色库蚊幼虫的实验研究

菌体在水体中不能繁殖，易于分解沉淀，脱离蚊幼虫生活水层，因此持效短。但将菌体内的杀蚊幼毒蛋白基因转入丝状固氮鱼腥藻中达，成功建立的转基因1程藻。+仅解决了以上他，而。在实验室及现场应用中均证明具有非常高的杀蚊活性。但工程藻液在现场应用时不便于运输，难以商品化，因此作者研究了工程藻干燥贮存后的杀蚊活性，为以后的现场应用提供更完善的资料材料与方法1.1以；培养液为鱼腥藻专用培养液；培养基因工程藻需用新霉素抗性1；培养液1为251ml，1.2试验蚊虫为1龄敏感淡色痄蚊幼虫。山我所以虫室提供。
1.3基因工程藻j，cylindricapDC26.A.，必。，也。26和少712026，均为我室构建的含凡5毒蛋白基因的转基因工程藻。保存于光照培养箱中。
工程藻的大量培养应用1的玻璃瓶培养工程藻。用日光灯作为光源进行光照，温度控制在2730，同时为，加水中的含氧量，用加氧机通气，并根据生长情况定期收集。
工程藻的干燥及贮存将离心并过滤收集的，程藻藻糊均匀地铺尸洁净的塑料薄膜，用电风扇吹干。干透的藻片立即收集保存于密闭容器中，置于避光处贮夺工程藻的复苏及毒效测定干藻片粉把存0.5123年后。取少许放入1培诈液中，聊尸光照培养筘中培养，待其完全涪解复苏后，计算出工程藻活细胞的浓度。测试对淡色库蚊1龄幼虫的毒效，方法参考文献4 2结果2.1工程藻的干燥及贮萍火玷培养的工程蓰生长至颜色蓝绿色对数期时即可离心收集。在夏天25.左右时，藻糊般4860即可成，藻片，干秘片颜色呈淡绿或深绿色。保存干藻片的容器要密闭，否则藻片易潮解发霉或虫蛀。户藻片贮存3年后。除了颜色稍淡些，未明显变质。
可明显看到培养液变绿，但贮存时间长的藻片培养液变绿的速度慢，且培养液底部出现棕黄色己死的藻丝和藻细胞。取绿藻液在显微镜下观察，藻丝生长及发育正常。
2.3毒效测定以复苏后工程藻的活细胞浓度观察对蚊虫的毒效。贮存了0.5123年后的3种转基因程藻对淡色库蚊龄幼虫的杀灭效果1.结果显，尽管贮存的工程藻随时间的，加其中少部分工程藻出现死现象，影响了其杀蚊幼活性，但在浓度为105个数量级以时，48仍可杀死绝人部分蚊幼虫。53年以1的工程藻在，41数啁级，也能杀死部分蚊幼虫。同时3种转基因工程藻之间杀蚊幼效果差异无显著性。
讨论基因工程产品其穿梭质粒的稳定遗传非常重要，而蓝藻质粒的稳定遗传是其特性之4.我们的研究中，工程藻干燥后贮存3年以上再复苏，仍具有杀蚊活性，穿梭质粒保持着较高水平的达，这进步证明了蓝藻质粒的稳定遗传。在干燥方法上选择电风扇吹干且注意干透。以防发孬变质。取以满意结果而选择电烤箱烤干，由于未掌握好烤箱温度及烘烤时间，破坏了藻细胞的生物学活性，因而复苏效果不理想。虽然干燥贮存的工程藻灭蚊所需浓度高于新鲜培养的藻液，但由于其比藻液更易保存运输和商品化，因而具有更大的推广应用价值。
贮存时间贮存藻种细胞浓度死率时间贮存藻种细胞浓度死率半年2年1年3年2阎歌，刘湘萍，张晓静，等。建立种基因工程藻杀蚊幼蓝藻。寄生虫与医学昆虫学报，1996 3阎歌，刘相萍，张晓静，等。基因工程杀蚊幼蓝藻的现场初步观察。中国媒介生物学及控制杂志，1996785 88.4刘相萍，阎歌，张晓静，等。基因工程杀蚊幼蓝藻稳定性的实验研中国媒介生物学及控制杂志，199999100.