冷冻干燥保存血小板的研究进展

修回本文编辑王良华冷冻十燥保存血小板的研究进展曹伟韩额军事医学科学院野战输血研，所。北京100850血小板是血液中的种重要组成成分。它主要参与血栓形成和凝血过程，在大量失血和化疗放疗等处理后造成的1小枵减少症。出片的冶疗过程。需要进血+枵输注，因此。保证足够的血小板贮备和供应显得尤为重要。目前，临床应用血小板存在供应不足和浪费问。主要是血小板保存技术在方法学上的局限性所造成的。血小板的保存方式有以下种，常温22土2保存，此条件下保存的血板由于部分活性的丧失和微生物的污染。根据美国药品监督管理局规定多只能保存5天；冰冻保存，这种保存方法可以大大延长血小板的保存时间，临床实验证明冻融血小板聚集功能仅为新鲜血小板的5060，而且需要笨重的冰箱和存储设备；冷冻干燥保存。冷冻干燥血小板可以在常温5长时间保存。不需要冷冻存储设备。在此，本文对冷冻干燥保存血小板简称冻干血小板进行综述，1冻干血小板的研究历史早在20世纪50年代，人们就开始了对冻干血小板的研宄然而在当时的研宄中并没有得到人们所期望的实验结果。相反。冻干血小板既没有保持结构的完整性。再输注给血小板缺乏症儿科患者或动物出血模型后，也没有现出足够的止血作用，早期探索的失败。让人们对这种方法产生了怀疑，于是这研究就被遗弃了多年。直到70年代末80年代初。也，1等135发展了这项技术。并利用固定后冻干血小板保持了从受体活性的特点对人和动物血浆中的，你逊行检测。从此。咐；1时小板的研，焕发1新的1.
机。1995年他们采用1.8多聚甲醛稳定血小板洗漆后姑浮于饭柠，酸缓冲浪。在204厂1条仲下冻干241然后保存在80，低温冰箱中，冻干血小板用咪唑缓冲液再水化。这种再水化冻干血小板在电镜观察现出正常的形态，利用流式细胞术测定面受体达与正常血小板相似。在狗鼠止血时间延长模型输注实验中，证明冻干血小板有修复止血时间的作用。另外，用1.8多聚甲醛处理血小板能有效地除去细菌和病毒7.在接下来活化和粘附进，1定时。等利葡；糖孵育血小板后进行冻干，在理想的条件下获得了7585的了突破性的进展。他们在血小板的冻干保存体系中添加了海藻糖。使得冻干血小板再水化后达到了85的存活率。同时水化冻反对凝0柬1.狡设蛋白31.UK2Pm，lEMn.6mgmlra5WXNKUK新鲜血小板几乎完全相同，通过傅立叶变换红外光谱学分析明这种再水化冻干血小板的膜以及膜蛋白成分与新鲜血小板极其相似。
2冻干保存血小板的生物学特征血小板冻干是将加入保护剂的血小板在30，条件下冷冻干燥，以固态形式储存在常温下的种血小板保存方损伤。使得冻干血小板在形态结构面糖蛋白体外及体内实验中现出与新鲜血小板不尽相同的特点。在形态结构上。再水化后的冻干血小板在超微结构上仍然维持了较好的形态。尽管出现伪足并向球形转变。但尚未发现空泡样血小板以及血小板互相粘附聚集等严重激活损伤的改变，血小板的基本结构仍然清晰可辨。储存颗粒仍然散布于血小板细胞内。尚未完全进入中央区。储存颗粒仍然可以看到完整1细胞技面拟1以1的达方而。主要研，的1和粘附在剥脱的内皮下组织上。而与完整的血管壁不发生粘附。由此历1等认为即使经过固定和脱水处理后。血小板面的1还是怙的。17粘附过稗水担控制因子的作。祚88喂，浒流研，1.吹拟入员在薄水化冻干血小板悬液中加入大量的抗4单克隆抗体，再输入8331.检测系统中冻干血小板的粘附被降低或阻断，这现象说明冻干血小板中的广叩依然保持着粘附控制术测定显再水化冻干血小板，的达和分布与固定新鲜的血小板十分接近，仅仅有小部分的冻干血小板5 101.现出；1叫性，这种减少与浪体浓集杌小，站存5后差不多。在中仙的达上。通过单克隆抗体和流式细胞术分析。再水化冻干血小板中很少5现出仙阴性。但是阳性细胞荧光密度的峰值比固定新择素0062和0063等，这些都可以作为冻干后血小板活化的检测指标。
由于血小板面的些糖蛋白没有发生改变或改变不多，因此再水化冻干血小板在些体外检测指标上，也现出近似于正常血小板的实验结果。1等13研宄出种检测系统，用以研宄血小板在聚集机制中的作用。这种检测系统很好地评价了流动条件下保存的血小板与内皮下组织之间的相互作用。利用这种检测系统所得到的数据显冻干血小板依然保持了部分的粘附功能14.在，的研究中，他们进行了两项实验来鉴定交联和冻干对血小板细胞内功能的影响5.首先，他们比较了再水化冻干血小板与新鲜血小板活化依赖的蛋白激酶的活性，发现凝血酶激活酸化，虽然与新鲜血小板相比有定的降低。在细胞膜通透性的实验中，他们发现冻干血小板细胞膜通透性增强导致体能够通过磷酸激酶和或，12+的作用刺激蛋白激酶同时，脂酰肌醇3激酶信号传导途径在再水化冻干血小板中至少部分存在12+钙调蛋白和丝裂原激活的蛋白激酶信号传导途径也得到了部分保存。这些结果证明冻干血小板在凝血过程中不仅仅只是作为个凝血酶原的面，而且它对刺5应答产生的信号传导在血栓形成过程中也起到了正反馈放大的作，与胶原蛋白刺激的新鲜血小板相似。水化冻干血小板还能有效的缩短血浆凝固时间。使凝血酶原转变成凝血酶。
而在体内实验中，再水化血小板也现出令人鼓舞的实验结果。再水化冻干血小板能够有效的缩短血小板减少的动物模切；勺止间。从151；缩短到0.531；在1网状内皮阻塞血小板减少动物模型中，冻干血小板体内止命；舌性心庄时比较。1〃大约468叫。13建立种免疫抑制的血小板缺少的兔模型，8，6等人利用这种动物模型对人的冻干血小板在体内的作用进行评价。在他们的实验中，再水化冻干血小板输注后的止血时间2528与输注同样数量的新鲜血小板1后的止血时间2038没有统计学的差别。然而所有的冻干血板在输注1后体内循环次检测的止血时间长。但在输注后3的时候依然保持在600以内1东干小板输；主后31；时体内恢复辛为50；1.
3的时候为22.这些结果明再水化冻干血小板在循环过程中依然保持了部分功能，不仅仅是作为种提供迅速止血效应的临床制剂。
优点。但是，作为项不是很成熟的技术，冻干血小板还存在着许多不尽如人意的地方。笔者认为在今后的研究中要从以下几个方面入手。
首先，在膜保护方面。在开始的研宄中，采用多聚甲醛处理，固定血小板面的糖蛋白和磷脂分子，这样就不用再加入冻干稳定剂了，可是这种保存的方法造成后面洗脱的麻烦，而且这种方法还存在些问有待解决。有人想到将海藻糖用于冻干血小板。海藻糖是种冻干时用来稳定蛋白和膜的双糖171尽管用海藻糖冻干的血小板在干燥状态下呈现出完整的形态。但是再水化后血小板会发生渗透溶解。
有人在此基础上添加葡萄糖和羟乙基淀粉进行冻干。前者能够满足血小板对糖的需要。后者有高的玻璃化温度。初的实验结果显再水化后40的血小板对凝血酶有反应9代次，激小，的采冻干仞再水化过程中会不⑴啦免地发生血小板的激活。大部分学者基于血小板的保存过不1血+，的激活总是1.小板的保存损伤平行。认1.小板保存损仿是山于血小，沾化引起的2.6，如认为七制备的血小板有2030现为，选择素阳性就被认为己经被活化。不能用于更深入的研宄。目前。对血小板的活化化剂成为可能。
第。再水化过程能够造成冻干血小板的膜损伤，在近的海藻糖装载血小板的冻干保存方法中，贾，等人发现在371时，血小板对海藻糖的吸收率达到50甚至更高，这种已经吸收了海藻糖的血小板冻干后。再水化获得的恢复率为88，虽然其中有部分1025细胞是部分溶解的或是球形的。这与前面的叙述是致的。为了尽量减少这种损伤。他们采用了种预先再水化的程序，这种将冻干血小板置于水蒸气中预先再水化的过程使得部分溶解的血小板数降低至。虽然通过记数仪记数得到的恢复率比起直接再水化后得到的恢复率有轻微的降低。但是通过显微镜观察及分光光度测定得知预先再水化的血小板比直接再水化的血小板密度高虽然这种方法还存在着许多的不足。但是它所显出来证据显冻干保存血小板有着美好的前景。但是要想取得真正的突破。使得冻干血小板能够用于临床治疗输注，就要求人们对冻干血小板在临床应用的安全性和有效性上进行更多的实验研宄。
3发展血小板冻干保存技术的关键环节尽管冻干保存血小板的实验结果显出冻干保存的可行免，侩碰，碟，赫备疆撕油，酿摇特赋跑岫刘明东，韩颖，马恩普，等。冻干保存后血小板超微结构的改变。军事医学科学院院刊，1999，23132 20吕俊海，刘明东，韩颖。血小板保存损伤的研究进展。中国输血200209收稿，20030520修回本文编辑刘晓明成嘟市成年4年通，椅厂甸蚧太界厢本碰臣式采血椅专利号972，5453.7蕙位即背可调至平位。并可根据用户要求增设锁定脚轮。以满足各血站的特殊使用要求。
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