丫啶橙荧光染色结膜印迹细胞定量检测干燥性角结膜炎

眼部印迹细胞检查是采用醋酸纤维素滤纸或生物孔膜获取结角膜层细胞标本的种检，法1.我们根据既往细胞染色的经验，建立了啶橙荧光染色法进行结膜印迹细胞学检查如下。
1对象和方法1.1对象我院眼科门诊已确诊的干燥性角结膜炎患者23例38眼，其中双眼15例，单眼8例；男例17眼，女13例21眼；年龄670平均年龄45.8岁。已排除实质性结膜干燥症3，8综合征。患者既往有慢性结膜炎单疱病，性角膜炎反复发作干燥性角结膜炎和或溃疡眼部长期用药5以上的病史。所有患者的泪液试验由专人操作，结果为35mmmin15眼，6，1523眼。病程0.2510从平均7月。另选择同龄正常人1例13眼供体眼球之球结膜5例7眼作为对照组。
方法①醋酸纤维素滤纸的制备将滤纸剪国西安市眼科研究所成条状2，56大小，于蒸馏水中煮沸10以消除滤纸面的活性作用，然后取出晾干备用。，结膜印迹细胞采取法5外地卡因面麻醉，用无菌棉签吸干泪液，将事先准备好的透明纤维素滤膜粗糙面向下，用无齿镊及玻璃棒使其贴附于鼻侧下睑结膜处保留3，然后取出，滤膜粗糙面向上放在载玻片上待用。啶橙荧光染色法给放在载玻片上的滤膜粗糙面上加2滴108啶橙生理盐溶液，染色3，5，1后于荧光显微镜下观察。观察啶橙荧光染色标本适合的激发滤片是8012或8激光滤片。根据滤纸片上细胞附着的多寡，分别观察，3个视野，然后按心，8分类法131进行分级，分级依据包括杯状细胞密度上皮细胞的形态核质比例7，值及标本染色后胞质颜色的变化等4项指标。0级为正常上皮细胞。上皮细胞大小基本致，小卵圆形，胞核为亮绿色，胞质呈橘黄色少冗值为。皮细胞间散在中等量的杯状细胞。1级结膜皮细胞轻度扩大，胞质仍呈橘黄色，州0值为但无角化杯状细胞开始减少密度下降级所有结膜上皮细胞均扩大变扁，胞核仍为亮绿色，胞质呈橙红色，阶0值为14，但无角化，杯状细胞全部挺失。1级所有皮细胞的胞质均呈砖红色，胞核呈绿色或红色，阶，6.期轻度角化。
级上皮细胞胞质浓缩呈砖色，细胞核固缩呈红色，阶值为18.中度角化。级上皮细胞胞质浓缩，可大量角质蛋白，均染砖红色，细胞核已崩解成碎片，亦为红色，严重角化。
2结果干燥性角结膜炎患者23例38眼中，25眼细胞分级为级，13眼细胞分级为1级。
正常对照组的15眼细胞分级为，1级，5眼细胞分级为级。
3讨论自4等14977首先报杏印迹细胞学检查以来，它作为种，单易行的眼面细胞学检查方法，经过不断的改进和完善，目前用于检查某胜外眼病获得满意的效果。现已广泛应用于各种干眼症的结膜细胞学分析角结膜微生物感染的诊断细胞面抗原的分析角结膜细胞分泌物的分析等多种眼研究，为临床提供了种实用的诊断及鉴别诊断的辅助方法。我们采用陡橙荧光染色法测定了干燥性角结膜炎患者及正常对照组的结膜印迹细胞，在干燥性角膜炎患者23例，8眼的印迹细胞检查中，随结膜细胞髹状化生皮细胞扩大扁平，核固缩，出现角化，其中25眼细胞分级为级，3眼细胞分级为级；正常对照组的15眼细胞分级为，1级，5眼细胞分级为1级。出现个别人的杯状细胞密度下降，但无角化。
既往文献报道的印迹细胞染色法为过碘酸雪欠4分染色及苏木素染色方法，属于较经典的脱落细胞染色法，染色效果好，但所需试剂较多6，7种，且染色步骤多，所需时间长。采用不透明的乙酸纤维素滤膜，需经甲苯树脂等处理透明后才能观察。每张片了约需！左右。我们根据既往细胞染色的经验，在查阅大量文献的基础上，建立了种荧光染色方法，该法所用试剂只有种荧光染料啶橙，取材采用种透明滤膜，所取标本无需固定，了直接进行荧光染色，片子不需透明，便可观察，只需1结果便可出来。啶橙是常用的活细胞荧光染料5，活细胞核吸附少量色索呈亮绿色，细胞死后吸附大童色素呈红色荧光，汀对细胞内，和1六两种核酸有稳定的分色性能，细胞核，1为亮黄绿色荧光，胞质和核仁中的只1为橘黄橘红色荧光。
我们采用8的啶橙牛理盐溶液进行染色，不但可以观察细胞核质比例的变化杯状细胞的数量，而且可以确认结膜细胞髹状化生的程度，为干燥性角结膜炎病变程度提供临床定量诊断，指导临床用药。啶橙荧光染色检查法操作简便，可以反复进行动态观察病变的发生发展转们以及观察药物的疗效。通过判断结膜细胞功能状态，从而对干燥性角结膜炎患者的眼部干燥程度进行定量检测，为临床的治疗提供实验室依据。
在目前荧光显微镜已普及的情况下值得推广。
1薛眷燕印迹细胞学检，在眼科的应用。国外医学眼科学分册，1999；2孙秉基，徐锦堂，主编。角膜病的埋论基础！3临床北京科，技术文献5许屏，主编。荧光和免疫荧光染色技术及应用。北京人民卫生出版社，欢投稿欢此打同欢逆刊，户告